Окраска цитологических мазков по романовскому — АНТИ-РАК

7.Приготовление цитологического мазка, правила фиксации и окраски. Теория цитологических окрасок

Окраска цитологических мазков по романовскому — АНТИ-РАК

Техникаприготовления мазковПолученноеколичество материала не всегда определяетвозможности диагностики, иногда оченьмалое количество материала являетсядостаточным для постановки диагноза.

Наличие большого количества крови частоявляется помехой.

При её наличии мазкинеобходимо делать как можно скорее,иначе наступает свертывание и изсвернувшегося сгустка очень трудносделать мазки и провести исследование.

Материал наносятна стекло и очень аккуратно делаютмазки, т. к. клетки очень ранимы, а наличиебольшого количества разрушенных клетокмешает правильной диагностике.

Правильноприготовленный мазок из нормальной илипатологической измененной ткани долженотвечать следующим условиям:

  • Мазок должен начинаться на 1 см от узкого края предметного стекла и заканчиваться примерно в 1,5 см от другого края предметного стекла; мазок не должен достигать длинного края стекла, между мазком и краем предметного стекла должно оставаться расстояние примерно 0,3 см.
  • Хороший мазок должен быть максимально тонким (максимально приближающимся к однослойному), равномерной толщины (не волнообразным) на всём протяжении.
  • Мазок из осадка жидкого материала (жидкость из серозной полости, смыв из различных органов, содержимое кистозной полости и т.п.) должен заканчиваться у одного из узких краёв предметного стекла в виде следа, оставленного как бы тонкой щёткой.
  • Клетки в мазке должны быть равномерно распределены, все участки мазка должны хорошо просматриваться и не содержать «толстые участки», содержащие непросматриваемые (плохо просматриваемые) скопления или комплексы клеток.

Изжидких пунктатов мазкиготовят подобно мазкам крови, еслиполученная масса плотная или комковатая,то помимо мазков можно приготовить иотпечатки на стекле.

Метод отпечатковимеет определенные преимущества.

  • Во-первых, клетки подвергаются гораздо меньшему травматизму.
  • Во-вторых, есть возможность расположения клеток пластами, что помогает при описании цитологического препарата характеризовать и соотношение клеток между собой.
  • В-третьих, если материал богат кровью, его необходимо нанести на стекло и тогда выбирать оттуда “беленькие крупинки” и ими делать мазки.

Метод отпечатковприменим при использовании цитологическогометода во время операционноговмешательства, а так же получениибиопсии. Этот метод может быть использован,как самостоятельно, так и параллельнос гистологическим анализом.

В этихслучаях помимо пункций проводят получениеотпечатков с удаленных или обнаженныхорганов, с помощью прикосновения стеклапредметного к исследуемой ткани.

Также можно готовить препараты при полученииматериала методом соскоба

Жидкости,полученные при пункции,тут же центрифугируют, далее сливаютверхний слой из центрифуги, а из осадкаделают  мазки, которые и подвергаютцитологическому исследованию. В некоторыхслучаях приготовленные препараты можнопросмотреть под микроскопом, однакодиагностику патологии необходимопроводить только по окрашенномупрепарату.

Длядифференциальной диагностики используютцитохимические методики. Чтобы установитьхарактер секреции и межуточного вещества,используют окраски, применяемые вгистологии (мукармин для выявленияслизи, окраска пикрофуксином длявыявления коллагена, остеоида).

Если материаладостаточно, клетки сохраненные, хорошоприготовлен и окрашен препарат, даетсязаключение о гистологической форме суказанием степени дифференцировки(низкодифференцированная аденокарцинома,плоскоклеточный ороговевающий рак). Втех случаях, когда материал и цитологическаякартина недостаточно убедительна дляустановления конкретного диагноза,дается описание препарата, отдельныхклеточных элементов и, при возможности,их оценка.

Необходимойпредпосылкой для точной оценкиморфологических особенностей клетокв мазке  является правильносделанный, качественно фиксированный,хорошо окрашенный и методологическикорректно изученный мазок, поступающийв лабораторию в сопровождении необходимыхклинико-инструментальных и анамнестическихданных. Невыполнение этих условий ведетк неправильному распределению клетокткани, неполному выявлению ихморфологических особенностей, «пропуску»важной диагностической информации напредметном стекле или отсутствиюкорригирующей клинической информациии, тем самым, к ошибочной оценкецитологической картины, а значит кнеполноценному или ошибочного диагнозу.Если мазки были приготовлены внелаборатории, то в соответствии с темиже требованиями оценивается ихмакроскопический вид. Сотрудникилаборатории должны постоянно обучатьпредставителей клинических отделений,участвующих в приготовлении мазков.

Приготовлениестекол

Стекла дляприготовления цитологических препаратовдолжны быть чистые, обезжиренные исухие.

1. Стекла тщательнопромывают щеткой в теплой мыльной (илис моющим средством) воде.

2. Основательнопромывают в проточной теплой воде.

3. Затем кипятят1—2 часа в воде с добавлением соды (2—3%)или моющего средства.

4. После хорошоополаскивают в чистой горячей воде ипромывают в проточной (1—2 часа).

Обработанные ипромытые в воде стекла протирают мягкойтряпкой, держа стекла за края, и хранятв смеси Никифорова (равные части 96°спирта и эфира). По мере надобностипинцетом извлекают стекла из смесиНикифорова и протирают сухой тряпкой.Обработанные таким образом стекла могутбыть использованы для приготовленияцитологических препаратов.

Дляпроведения цитохимических исследований оченьхорошие результаты дает обработкапредметных стекол и других стеклянныхпредметов в хромовойсмеси следующегосостава:

Двухромовокислыйкалий (бихромат калия) — 100 г; вода горячая— 1000 мл; неочищенная серная кислота —100 мл.

Дляприготовления хромовой смеси растворяютв горячей воде двухромовокислый калий,затем охлаждают раствор и после этогодобавляют серную кислоту.

Кислоту льютосторожно (обязательно в вытяжномшкафу), при этом смесь весьма сильнонагревается и приобретает темно-коричневыйцвет.

В этом составе предметные стеклаи другую стеклянную посуду выдерживают2—3 дня, а после промывают в проточнойводе в течение 1—2 часов.

На хорошо обезжиренномпредметном стекле вода должна растекатьсятонким слоем, а не собираться в капли.

Фиксация

Фиксация мазкапроводится в соответствии с методикой,обусловленной биологическимматериалом, взятием  дляцитологического исследования  (влажная фиксация биологическогоматериала  или  подсушиваниеего на воздухе). При влажной фиксацииприготовленный мазок помещается вфиксирующую жидкость, затем подсушиваемна воздухе. Недостаточная фиксациямазка ведет к некачественному окрашиваниюклеток.

  1. Правильная фиксация мазка  обусловливает стойкость клеток по отношению к содержащейся  в красках  воде, которая  в нефиксированном мазке изменяет строение клеточных элементов. При фиксации мазка происходит коагуляция белка, в результате чего клетки прикрепляются к предметному  стеклу;

  2. При фиксации цитологических препаратов должны использоваться фиксаторы: метиловый спирт, этиловый спирт, смесь Никифорова, фиксатор Май- Грюнвальда, фиксатор Лейшмана, ацетон (для иммунноцитохимии).

Еслиэто специально не оговорено методикой,то, как правило, фиксируют высушенныемазки. Лучшим фиксатором для цитологическихпрепаратов является метанол.В метаноле фиксацию проводят от трехдо десяти минут.

Крометого, для фиксации может бытьиспользован этиловыйспирт 100°.Время фиксации составляет 10—30 минут.

Вкачестве фиксатора может использоваться смесьНикифорова (времяфиксации минимум 15 минут, максимум 1—2часа). Некоторые красители (Лейшман,Май-Грюнвальд) являются одновременнофиксаторами.

Окраскацитологических препаратов

Качественноеокрашивание позволяет правильноидентифицировать клеточные элементымазка и оценить их особенности примикроскопии. В адекватно окрашенноммазке структуры цитоплазмы,  ядра,ядерного хроматина, ядрышек окрашеныэлективно.

  1. При применении любой методики окрашивание мазка важно точно соблюдать последовательность процедур приготовления растворов и временные промежутки времени в течение процесса окрашивания.

  2. Существующие в продаже партии красителя имеют различную интенсивность окраски.

    Это обязывает опытным путём установить оптимальные концентрации (разведение) и время окрашивания для каждого флакона красителя, который устанавливает при окрашивании серии препаратов растворами с различной концентрацией красителя, меняя длительность его воздействия. При приготовлении растворов необходимо учитывать рН воды: она должна быть нейтральной (рН 6,8 – 7, 2) что обеспечивается использованием буферных растворов.

  3. Рекомендуемые методы окрашивания цитологических мазков: азур – эозиновый, по Романовскому – Гимзе, Лейшману, Маю – Грюнвальду, Паппенгейму; гематоксилин – эозиновый, метод Папаниколау.

  4. Для уточнения диагноза рекомендуется использование цитохимических и иммуноцитохимических методов анализа в соответствии с принятыми методиками.

8.Современныепредставления о гемопоэзе. Доказательтствасуществования родоначальной гемопоэтическойклетки (эксперименты J.TillMcCullach).1907-1909гг. – унитарная (монистическая) теориякроветворения предложена русскимгистологом-цитологом Максимовым.

Онадо сих пор является ведущей теорией,говорит о том, что в основе гемопоэзалежит одна- единственная клетка, дающаяначало всем росткам кроветворной ткани(свойство полипотентности). ПосколькуМаксимов был гистологом, он естественнопытался найти морфологические признакиПСКК.

Максимов считал, что оналимфоцитоподобная, мезенхимная посвоему происхождению.

1961 г.

– Till, McCulloch(Австралия) вводили взвесь костногомозга внутривенно смертельно облученныммышам, у которых в селезенке на 7-14 суткиформировались макроколонии, состоящиеиз разного типа миелоидных элементов(гранулоциты, эритроциты, мегакариоциты,смешанные колонии), впоследствииобнаружены лимфоидные клетки. •Ретрансплантация отдельных колонийтакже приводит к расщеплению и образованиюразных типов колоний – полипотентностьи способность к самоподдержанию КОЕс8-12.

Источник: https://studfile.net/preview/6831671/page:3/

Окраска мазков

Окраска цитологических мазков по романовскому — АНТИ-РАК

ПРИГОТОВЛЕНИЕ МАЗКОВ

Методы подсчета лейкоцитарной формулы

Лейкоцитарная формула – это процентное соотношение различных видов лейкоцитов. Подсчитывается при микроскопии окрашенных мазков крови или в гематологических анализаторах.

Мазки крови готовят на предметных стеклах, которые предварительно моют и обезжиривают.

Подготовка стекол. Стекла (новые и бывшие в употреблении) замачивают на 8-10 часов в 2% растворе хозяйственного мыла или СМС в эмалированной посуде, кипятят в этом же растворе 5-10 минут.

Более длительное кипячение и использование алюминиевой посуды не рекомендуется, так как приводит к помутнению стекол. Промывают стекла в проточной воде, насухо вытирают и помещают для обезжиривания на 30-60 минут в смесь Никифорова (спирт 96% и диэтиловый эфир в соотношении 1:1).

Насухо вытирают чистой тканью и хранят в закрытой чистой посуде.

Приготовление мазков. Мазок крови делается с помощью шлифованного стекла с идеально ровным краем, ширина которого должна быть на 2-3мм меньше, чем у предметного стекла. После прокола пальца первую каплю удаляют сухим ватным тампоном.

К куполу следующей капли прикасаются предметным стеклом на расстоянии 1,5-2см от края стекла. К коже в месте прокола не прикасаться! Капля крови на предметном стекле должна иметь диаметр 2-3мм.

Шлифованное стекло ставят под углом 45º на 1-2мм перед каплей и двигают его назад к капле так, чтобы вся кровь растеклась по краю шлифованного стекла. Быстрым легким движением делают мазок, пока не кончится вся капля крови. Высушивают мазки на воздухе.

Маркируют их простым карандашом, обозначая на толстой части мазка фамилию и инициалы пациента или его регистрационный номер. Делают не менее двух мазков.

Требования к мазку. Правильно приготовленный мазок должен быть:

– равномерной толщины, полупрозрачным, желтоватого цвета;

– достаточной величины – занимать ½ – ¾ длины предметного стекла, отступив от края на 1-1,5см;

– оканчиваться «метелочкой».

Толстые мазки для исследования не пригодны, так как клетки в них располагаются в несколько слоев и деформируются. В правильно приготовленных тонких мазках клетки располагаются в один слой.

Готовые высушенные мазки крови фиксируют, а затем окрашивают. В неокрашенном виде мазки сохраняются при комнатной температуре в течение 3 дней.

Фиксация мазков предохраняет элементы крови от воздействия содержащейся в красках воды, под влиянием которой в нефиксированных мазках происходит разрушение эритроцитов и изменяется морфология лейкоцитов. Фиксация также вызывает коагуляцию белков и закрепляет мазок на стекле. Фиксацию проводят либо в специальной кювете, либо в широкогорлой банке с хорошо закрывающейся крышкой.

Для фиксации используют следующие реактивы:

– метиловый спирт – время фиксации 3-5 минут;

– раствор эозинметиленового синего по Май-Грюнвальду (фиксация 3 минуты);

– этиловый спирт (фиксация 20-25 минут);

– смесь Никифорова (фиксация 30 минут).

Фиксированные мазки высушивают на воздухе и окрашивают.

Окраска мазков. Проводится в специальных кюветах или на «мостике». В качестве унифицированных приняты 3 метода окраски мазков крови:

– по Романовскому-Гимзе;

– по Нохту;

– по Паппенгейму.

Принцип окраски мазков крови.Основу современных методов окраски клеток крови заложил русский врач Д.Л. Романовский, который в конце 19 века предложил окрашивать препараты одновременно двумя красителями – щелочной и кислой реакции.

Различные клеточные структуры имеют разную рН и связываются с красителем противоположной реакции. Ядра клеток богаты нуклеиновыми кислотами, имеют кислую реакцию и окрашиваются красителями щелочной реакции (метиленовым синим, азуром I и II) в сине-фиолетовый цвет.

Цитоплазма гранулоцитов, зернистость эозинофилов, эритроциты содержат щелочные белки, поэтому окрашиваются красителем кислой реакции (эозином) в розовый цвет.

Окраска по Романовскому-Гимзе

Реактив: готовая краска Романовского. В её состав входит азур-II (смесь равных частей азура-I и метиленового синего) и эозин. Заводская краска очень концентрированная и перед употреблением её нужно разводить. Степень разведения и время окраски определяется опытным путем и называется титрование краски Романовского.

Титрование краски Романовского. Готовят три разведения краски из расчета: 1, 2 и 3 капли красителя на 1мл дистиллированной воды. Каждым из разведений окрашивают 5 зафиксированных мазков в течение 20, 25, 30, 35 и 40 минут. На каждом мазке отмечают время окраски и разведение красителя.

После окрашивания микроскопируют мазки и определяют разведение и время, при которых получена наилучшая окраска. Эти условия, соответствующие лучшему окрашиванию, указывают на этикетке бутыли с краской. Например: титр краски – 1капля/мл; экспозиция – 30 минут.

Титрование краски Романовского проводят один раз перед использованием каждой новой партии красителя.

Ход окраски.В специальную кювету для окрашивания наливают раствор краски Романовского, приготовленный непосредственно перед использованием в соответствии с установленным титром. В рабочий раствор красителя опускают штатив с сухими фиксированными мазками. Красят мазки в соответствии с выбранной экспозицией. Промывают мазки проточной водой и высушивают на воздухе.

Источник: https://studopedia.su/13_46509_okraska-mazkov.html

АФОМК8-В-01

Окраска цитологических мазков по романовскому — АНТИ-РАК

ЭМКОСТЕЙНЕР АФОМК8-В-01 – первый отечественный программируемый автомат фиксации и окраски мазков крови.

 Автомат является медицинским изделием и предназначен для автоматической окраски мазков крови, цитологических, микробиологических и др. биологических препаратов на предметных стёклах по заданной программе.

 Прибор позволяет оптимально организовать в лаборатории рабочее место по окраске мазков. 

Фиксация и окраска осуществляется групповым методом – предметные стёкла размещаются вертикально в штативах.

Окрашивание производится путём последовательного программируемого перемещения штативов с предметными стёклами из исходных парковочных станций, куда штативы помещаются пользователем (лаборантом), в технологические станции, где проводится обработка препаратов (фиксация, окраска, промывка, сушка и пр.) в соответствии с заданной технологической программой. После обработки штативы с обработанными стёклами возвращаются в исходную парковочную станцию.

  • 8 станций (включая станцию сушки и проточную ванну промывки).
  • Групповая обработка стёкол.  Стекла размещаются вертикально в штативах из нержавеющей стали (стекла стоят на коротком ребре, при обработке препаратов стекло погружается в растворы на 2/3, поле метки стекла на окрашивается) .
  • Емкость штативов – 25 стекол толщиной 1 мм. (стандартная комплектация) или 20 стекол толщиной 2 мм. (по запросу) Возможна комплектация сдвоенными штативами на 50 (40) стекол и соответствующими ваннами и поддонами.
  • Гибкая конфигурация: все станции, кроме станций сушки и проточной ванны промывки, комбинированные, т.е. могут использоваться как для технологических операций, так и для загрузки штативов.
  • Замкнутая рабочая камера с принудительной вентиляцией, исключает попадание вредных веществ в воздух лаборатории.
  • Возможность загрузки штативов со стёклами во время проведения окраски, удобный доступ к рабочему столу.
  • Программирование режимов и параметров технологических обработок: выдержка, активация, окунание, время задержки, интервал запуска штативов в обработку, встряхивание (для удаления остатков технологических жидкостей) и др.
  • Ванны, штативы и поверхность стола рабочей камеры из нержавеющей стали.
  • Кинематическая схема обеспечивает не только подъём штатива со стёклами из ванны, но и его наклон, что обеспечивает эффективный слив технологической жидкости.
  • Управление и программирование с помощью сенсорного экрана. В процессе выполнения технологической программы состояние станций и ход технологической обработки отображаются на сенсорном экране и светодиодных индикаторах станций.
  • Программирование технологического процесса до 19 шагов. Запоминание 20 технологических программ и 50 названий технологических жидкостей. Ввод цифровой и буквенной информации на русском и английском языках. Возможность программирования пользователем.
  • Глубокая автоматизация: кроме выполнения программы, прибор самостоятельно определяет появление штатива для обработки, распознаёт наличие ванн и штативов, контролирует правильность конфигурации, тестирует состояние систем, напоминает о сроке годности используемых технологических жидкостей, по запросу выдаёт подсказки.
  • Возможна реализация наиболее востребованных методик: по Паппенгейму, Романовскому-Гимзе, Лейшману, Граму,  по Цилю-Нильсену,  Гематоксилин-Эозин и д.р.
  • Высокая производительность. При окраске по Романовскому производительность составляет до 400 стёкол в час.
  • Габаритные размеры: 600 х 530 х 420 мм.
  • Цена изделия – в несколько раз ниже цены зарубежных аналогов.
  • Не требуется техническое обслуживание. Автомат не нуждается в периодическом техническом обслуживании и регулировке. Дезинфекция поверхностей рабочей камеры автомата осуществляется по мере необходимости, но не реже 1 раза в неделю.
  • Безопасность. Рабочая камера автоматов замкнутая и находится под небольшим разрежением, что исключает выброс паров метанола (и других вредных веществ) в рабочее помещение лаборатории. Имеются электронные блокировки от разлива жидкости, от работы с незакрытой крышкой, противопожарные блокировки и пр.
Количество комбинированных станций6 шт.
Количество станций сушки1 шт.
Количество станций промывки проточной водой1 шт.
Размер предметных стёкол, мм75 x 25 x 1-1,2 мм
Максимальное количество стёкол в штативе50 шт. (или 25 шт.)
Температурный диапазон сушки30 – 50 °С
Вентиляция рабочей камерыпринудительная
Сенсорный графический экран320 x 240 пкс
Индикация состояния станцийсветодиодная
Количество поставляемых с автоматом методик окраски препаратов, не менее2
Максимальное программируемое количество методик окраски препаратов30
Максимальное количество технологических операций в программе окраски19
Максимальное количество наименований технологических жидкостей50
Потребляемая мощность, не более400 В·А
Масса прибора, не более30 кг
Масса в полном комплекте поставки, не более40 кг
Габаритные размеры прибора, не более600 x 530 x 420 мм
Напряжение питания автомата~ 220 ± 22 В (50 Гц)
  • 4 штатива на 25 стекол (1 мм) или на 20 стекол (2 мм),
  • 4 поддона под штативы,
  • 3 ванны для реагентов (комплектация для окраски по Романовскому-Гимзе),

Окраска гематологических препаратов по Паппенгейму. “ЭМКОСТЕЙНЕР” (АФОМК8-В-01) 50 стекол

Окраска гематологических препаратов по Паппенгейму. “ЭМКОСТЕЙНЕР” (АФОМК8-В-01) 25 стекол

Источник: https://www.stainer.ru/afomk8-v-01

Окраска цитологических мазков по романовскому — АНТИ-РАК

Окраска цитологических мазков по романовскому — АНТИ-РАК

  1. Удаляют парафин из срезов в орто-ксилоле или толуоле, проводят по спиртам нисходящей концентрации и доводят до воды (две порции ксилола или толуола – 3-5 минут, 96° этанол – 3 минуты, 80° этанол – 3 минуты, 70° этанол – 3 минуты, дистиллированная вода – 5 минут).
  2. Окрашивают гематоксилином 7-10 минут (в зависимости от зрелости красителя).
  3. Промывают в дистиллированной воде – 5 минут.
  4. Дифференцируют в 1% соляной кислоты на 70° этаноле до побурения срезов.
  5. Промывают дистиллированной водой, а затем слабым (0,5 %) раствором аммиака до посинения срезов.
  6. Окрашивают водным раствором эозина 0,5-1 минуту (в зависимости от желаемой окраски).
  7. Промывают в трех порциях дистиллированной воды для удаления избытка эозина.
  8. Удаляют воду из срезов в одной порции 70° этанола, двух порциях 96° этанола. Экспозиция в каждой порции спирта – 2 минуты.
  9. Просветляют срезы в двух порциях карбол-ксилола (смесь расплавленного фенола и ксилола либо толуола в соотношении 1:4 или 1:5) – 1 минута.
  10. Производят окончательное обезвоживание срезов в двух порциях ксилола или толуола. Пребывание срезов 2 минуты.
  11. Заключают срезы в канадский бальзам или синтетическую среду для заключения гистологических срезов.

Некоторые структуры плохо прокрашиваются гематоксилином и эозином (как правило гидрофобные) и требуют иных методов окраски.

Например, участки клеток, богатые липидами и миелином, остаются неокрашенными: адипоциты, миелиновая оболочкааксоновнейронов, мембрана аппарата Гольджи и др.

Классические методы окраски мазков крови

Мазки крови, высушенные на воздухе, окрашиваются специальными красителями с целью идентификации цитоморфологически важных структур в клетках крови.

    Кислые вещества клетки (выглядят базофильными) связывают основные красители.

Основные клеточные субстанции (ацидофильные) окрашиваются кислыми красками.

Нейтральные компоненты клетки визуализируются при помощи нейтральных растворов-красителей.

Краситель состоит из щелочной части (азур II — ярко-синий цвет), и кислой части (эозин — розово-красный цвет).

В настоящее время используется готовый краситель Романовского-Гимзе, из которого перед началом работы готовят рабочий раствор из расчета 1 капля краски на 1 мл дистиллированной воды.

Высохший фиксированный мазок помещается в кювету с рабочим раствором краски на 25-40 минут (конкретное время устанавливается опытным путем для каждой партии красителя).

    Ядра клеток — красно-фиолетовые; Эозинофильные гранулы — красновато-коричневые; Базофильные гранулы — синие; Нейтрофильные гранулы — фиолетовые; Цитоплазма лимфоцитов — голубая; Эритроциты — бледно-красные; Тромбоциты — наружная часть синяя (более светлая); внутренняя — фиолетовая (более темная).

Данный метод очень удобен для визуализации гранулоцитов.

Для окрашивания применяется готовый раствор эозинметиленового синего по Маю-Грюнвальду. Мазок без предварительной фиксации заливают красителем, через 5 минут промывают и высушивают.

    Лимфоциты — ядра: сине-фиолетовые; цитоплазма: голубая; Моноциты — ядра: сине-фиолетовые; цитоплазма: серо-голубая; Гранулоциты — ядра: сине-фиолетовые; гранулы: красные, фиолетовые, темно-синие (зависит от типа); Тромбоциты — наружная часть голубая; внутренняя — фиолетовая; Эритроциты — розовые.

Представляет собой комбинацию двух предыдущих методов.

Сухие нефиксированные мазки помещаются в кювету с раствором Мая-Грюнвальда на 3..5 минут. После этого контейнер с мазками ополаскивается дистиллированной водой, после чего мазки помещаются в кювету с разведенным раствором Романовского-Гимзы на 20..30 минут. После этого мазки промываются проточной водой и высушиваются.

    Ядра клеток — красно-фиолетовые; Цитоплазма лимфоидных клеток — светло-синяя; Лимфоидная азурная грануляция — ярко-синяя; Миелоидная азурная грануляция — фиолетовая; Нейтрофильные гранулы — светло-фиолетовые; Эозинофильные гранулы — красные, красно-коричневые; Базофильные гранулы — темно-фиолетовые, черные; Эритроциты — розовые (полихроматофильные эритроциты — синеватые); Тельца Жолли — красновато-фиолетовые; Тельца Ауэра — ярко-красные.

Окраска по Райту

На сухой нефиксированный мазок наносится 1 мл красителя, через 1 минуту добавляется 1 мл дистиллированной воды. Через 2..3 минуты промывают в дистиллированной воде и высушивают на воздухе. Окраска аналогична предыдущему методу.

В красящих смесях Романовского и сходных с ним прописей Гимзы, Райта, Лейшмана в качестве ядерных краси телей используют тиазины.

В их ряду — тионин-анилиновый краситель и его моно-, ди-, три — и тетраметилпроизводные азур С, азур А и азур В, метиленовый синий — широко применяются в цитологических исследованиях как ценные ядерные красители со свойством метахромазии для эксфолиативной и пункционной цитологии, для клеток крови, костного мозга, окрашивания бактерий.

Сочетание тиазинов с красителями эозиновой группы дает известную много вариантность методов. Красители типа Романовского, названные по именам авторов, которые стремились добиться стабильности состава тиазинов (Гимза, Лейшман, Дженнер, Май-Грюнвальд, Мак Нил, Райт и др.), в принципе дают сходные результаты окрашивания.

Результаты окрашивания мазков крови: цитоплазма лимфоцитов окрашивается в светло-синий цвет, их ядра — в цвета от интенсивно пурпурного до фиолетового, ядра моноцитов в более светлый пурпурно-красный, их цитоплазма в мутный голубовато-серый, грануломеры тромбоцитов в красный, гиаломеры — в голубой, гранулы базофилов — в интенсивный сине-фиолетовый цвет, гранулы эозинофилов — в оранжево-розовый, а нейтрофильных лейкоцитов — в цвета от пурпурного до фиолетового.

Референтным признается метод Романовского, состоящий из азура В и эозина Y.

Азур-эозиновые красители позволяют четко определять ранние некробиотические изменения в клетках, поскольку обычный светло-голубой оттенок цитоплазмы резко меняется на светло-розовый.

В синий цвет обычно окрашиваются ядра, бактерии, риккетсии, тигроид и рибонуклеопротеиды, в голубовато-фиолетовый — гранулы тучных клеток и базофилов, цитоплазма зрелых клеток — от голубого до фиолетового и бледно-лилового цвета.

цитоплазма клеток в состоянии некроза и некробиоза — ярко-розовая, секреторные гранулы ацинарных клеток (под желудочной железы, слюнных желез) от розового до красного.

Амилоид, фибрин окрашиваются в розовый цвет, цитоплазма мышечных волокон, коллоид щитовидной железы — в серовато-синий, кератин — ярко-голубой. Эритроциты оранжево-красного цвета.

Окраска мазков по Wright-Giemsa (№ 9990710)

На основе эозинатов полихромного метиленового синего

1. Погрузить предметные стекла в раствор красителя Райт-Гимза на выбранное время (примерно 60 секунд). Не взбалтывать краситель!

2. Осушить или промокнуть свободную часть предметного стекла (или стеклодержатель), чтобы удалить избы ток краски.

3. Погрузить предметное стекло в буферный раствор примерно на то же самое время, что и время в красителе (60 секунд). Увеличение или уменьшение времени пребывания мазка в краске или буфере будет менять окончательный цвет препарата.

4. Осушить или промокнуть свободную часть препарата (или стеклодержатель), чтобы удалить избыток бу фера.

5. Погрузить мазок в раствор очистителя на 2-10 секунд, быстро взбалтывая.

6. Протереть обратную сторону стекла.

7. Высушить окрашенный мазок в вертикальном положении, поставив на адсорбирующую поверхность (напри мер, на фильтровальную бумагу). Не промокать мазок!

8. Нанести каплю масла и исследовать мазок под микроскопом. Результаты: как при окрашивании по Романовскому.

Ускоренный метод Giemsa-Kwik-Diff (№9990700)

Приготовленный мазок высушивают.

Готовят 3 контейнера (сосуды Коплина или кюветы). Наполняют Kwik-Diff раствором № 1 (фиксатор), второй сосуд — раствором № 2, третий — раствором № 3.

1. Погрузить стекла или держатели со стеклами 5 раз (1 секунда на погружение).

2. Дать стечь раствору в сосуд, обсушить край стекла.

3. Погрузить стекла или держатели стекол в раствор № 2,5 раз (одно погружение — 1 секунда). Дать жидкости стечь, обсушить край.

4. Погрузить стекла или держатель со стеклами в раствор № 3 — 5 раз (одно погружение — 1 с). Дать жидкости стечь, обсушить край фильтровальной бумагой.

5. Промыть стекло или держатель со стеклами путем погружения и покачивания в дистиллированной или де-ионизированной воде.6. Высушить на воздухе или использовать теплый воздух сушилки.

Окрашивание мазков гематоксилином-эозином

Могут использоваться различные виды гематоксилинов: Gill, Harris, кислый и неподкисленный.

1. Фиксация мазков в спирте-эфире или 96% этаноле.

2. Окрашивание в гематоксилине Gill 2 (№ 6765007) — 3-5 минут.

3. Промывание в проточной воде 1-2 минуты.

4. Окрашивание в 0,3% спиртовом растворе эозина Y (Instant, Eosin № 6765040) — 1 минуту.

5. Для сохранения микропрепарата рекомендуется заключение в бальзам после обезвоживания в спиртах. Результаты: ядра клеток — сине-фиолетового цвета, цитоплазма, мышечные волокна — различные оттенки розового цвета, муцины — светло-розового, кератогиалины — ярко-розового цвета.

Окрашивание мазков по Граму для выявления бактериальной флоры

1. Фиксация в пламени горелки мазком вниз при круговых движениях — 3 раза. Остудить.

2. Накрыть покровным стеклом с красителем кристаллическим фиолетовым Грама (№ 9990725) — 1 мин.

3. Промыть стекло до чистой промывной воды деионизированной или водопроводной водой.

4. Накрыть покровным стеклом с красителем йодным реагентом по Граму (№ 9990726) — 1 мин.

5. Осторожно промыть стекло деионизированной или водопроводной водой. Дать стечь.

6. Промыть стекло с обесцвечивающим раствором (№ 9990727) до потери окрашивания.

7. Осторожно промыть стекло деионизированной или водопроводной водой 5—10 с.

8. Накрыть покровным стеклом с красителем Safranin О (№ 9990728), подкрашивать 1 мин.

9. Осторожно промыть стекло деионизированной или водопроводной водой 5—10 с до чистого цвета воды.

10. Дать раствору стечь и высушить на воздухе. Можно осторожно промокнуть фильтровальной бумагой.

11. Исследовать с иммерсией.

Результаты: бактерии темно-фиолетового цвета — грамположительны. Бактерии грам-отрицательные окрашены в розово-красный цвет. Контролем качества окрашивания мазка является сине-фиолетовый цвет ядер лейкоцитов и эпителиальных клеток.

Молекулярно-биологические методы выявления вируса папилломы человека

Тонкослойные препараты — Cytospins — полученные на основе жидкостной цитологии, позволяют внедрить но вые методы для микроскопической диагностики, в частности, иммуноцитохимические, для выявления микроорганизмов в мазках из шейки матки.

Выявление группы риска при исследовании цервикальных мазков и дальнейший мониторинг позволяют уловить процесс озлокачествления на самых ранних стадиях и получить лучшие результаты лечения, а обнаружение HPV при пограничных и неясных изменениях эпителия шейки матки — выбрать адекватную тактику ведения больных.

Для выявления вируса папилломы человека фирма ЛабМетод предлагает ряд методов.

Метод обеспечивает выявление возбудителя внутри клеток. В основе метода лежит специфическое взаимодействие антигена и антитела. Предлагается широкая панель антител как для скрининга на вирус папилломы человека, так и для типирования вирусов, поскольку для эпителия шейки матки особенно «опасными» являются 16 и 18 типы.

Источник: https://kono-pizza.ru/tsitologiya/okraska-tsitologicheskikh-mazkov-gematoksilin-eozinom/

Консультация доктора
Добавить комментарий